Viisi vahvuutta:
● Laite, jossa on nukleiinihappouutto ja puhdistettu vaihe
● Laite, jossa on ultraäänipoistomoduuli
● Laite on konfiguroitu täysin automaattiseksi
● Laite, jossa on säädettävä lämpötilavahvistus
● Laite on konfiguroitu täysin suljetulla reagenssisarjalla
1. Pitääkö nukleiinihapon havaitsemisreagenssit uuttaa ja puhdistaa?
Nukleiinihapon havaitsemisen periaate on seuraava: alukkeen vaikutuksesta DNA-polymeraasia käytetään ketjureaktion amplifikaatioon templaatti-DNA:lle/RNA:lle (vaatii NA:n käänteistranskription), ja sitten havaitaan vapautuneen fluoresoivan signaalin määrä määrittämään. sisältääkö näyte havaittavan patogeenin nukleiinihappoa (DNA/RNA).
1) Näytteet, joita ei ole uutettu tai puhdistettu, voivat sisältää monia komponentteja, jotka vaikuttavat lopputulokseen: nukleaasi (joka voi liuottaa kohdenukleiinihapon ja aiheuttaa vääriä negatiivisia), proteaasi (joka voi vähentää DNA-polymeraasia ja aiheuttaa vääriä negatiivisia), raskasmetalli suola (joka johtaa syntaasin inaktivoitumiseen ja aiheuttaa väärän positiivisuuden), liian hapan tai liian emäksinen PH (joka voi aiheuttaa reaktion epäonnistumisen), epätäydellinen RNA (joka johtaa väärä negatiivinen käänteistranskription epäonnistuminen).
2) Joitakin näytteitä on vaikea monistaa suoraan: Gram-positiiviset ja jotkut loiset paksujen soluseinien ja muiden rakenteidensa vuoksi, jos ne eivät käy läpi nukleiinihappouutto- ja puhdistusprosessia, uuttovapaa pakkaus saattaa epäonnistua näytteitä.
Siksi on suositeltavaa valita testisarja tai instrumentti, jossa on nukleiinihapon uuttovaihe.
2. Kemiallinen uutto vai fyysinen ultraäänifragmentointiuutto?
Yleisesti ottaen kemiallista uuttamista voidaan soveltaa suurimmassa osassa esikäsittelyä ja puhdistusta. Paksuseinäisissä grampositiivisissa bakteereissa ja joissakin loisissa on kuitenkin myös niin, että kemiallinen uutto ei voi saada tehokkaita nukleiinihappotemplaatteja, mikä johtaa väärään negatiiviseen havaitsemiseen. Lisäksi kemiallisessa uutossa käytetään usein vahvoja aineita, jos eluointi ei ole perusteellista, reaktiojärjestelmään on helppo viedä vahvaa alkalia, mikä johtaa epätarkkoihin tuloksiin.
Ultraäänifragmentoinnissa käytetään fysikaalista murskausta, jota GeneXpert on menestyksekkäästi käyttänyt ihmiskäyttöön tarkoitetun POCT:n alan johtavassa yrityksessä, ja sillä on ehdoton etu joidenkin monimutkaisten näytteiden (kuten Mycobacterium tuberculosis) nukleiinihappouutossa.
Siksi on suositeltavaa valita testisarja tai instrumentti, jossa on nukleiinihapon uuttovaihe. ja se on optimaalinen, jos siinä on ultraäänipoistomoduuli.
3. Manuaalinen, puoliautomaattinen ja täysautomaattinen?
Tämä on työvoimakustannusten ja työn tehokkuuden ongelma. Tällä hetkellä lemmikkisairaalat, joilla ei ole riittävästi henkilökuntaa, ja nukleiinihappojen erottaminen ja havaitseminen on tiettyä taitoa ja kokemusta vaativaa työtä. Ei ole epäilystäkään siitä, että täysin automaattinen nukleiinihappojen uutto- ja havaitsemiskone on täydellinen valinta.
4. Vakiolämpötilan vahvistus vai vaihtelevan lämpötilan vahvistus?
Monistusreaktio on nukleiinihapon havaitsemislinkki, ja tähän linkkiin liittyvä ammattiteknologia on monimutkaista. Karkeasti sanottuna entsyymejä käytetään nukleiinihapon monistamiseen. Vahvistusprosessissa havaitaan vahvistettu fluoresenssisignaali tai upotettu fluoresenssisignaali. Yleisesti ottaen mitä aikaisemmin fluoresenssisignaali ilmestyy, sitä suurempi on näytteen kohdegeenipitoisuus.
Vakiolämpötila-amplifikaatio on nukleiinihappoamplifikaatio kiinteässä lämpötilassa, kun taas vaihtelevan lämpötilan amplifikaatio on syklistä vahvistusta tiukasti denaturaatio-pariutumis-pidennyksen mukaisesti. Vakiolämpötilan vahvistusaika on suoritettu, kun taas vaihtelevan lämpötilan vahvistusaikaan vaikuttaa suuresti instrumentin lämpötilan nousu- ja laskunopeus (tällä hetkellä monet valmistajat ovat pystyneet tekemään 40 vahvistussykliä noin 30 minuutissa).
Jos laboratorioolosuhteet ovat hyvät ja kaavoitus tiukka, on perusteltua sanoa, että tarkkuusero näiden kahden välillä ei ole suuri. Vaihtelevan lämpötilan amplifikaatio syntetisoi kuitenkin enemmän nukleiinihappotuotteita suhteellisen lyhyemmässä ajassa. Laboratorioissa, joissa ei ole tiukkaa vyöhykejakoa ja ammatillista koulutusta henkilökuntaa, nukleiinihappoaerosolivuodon riski on suurempi, väärä positiivinen tulos ilmenee vuodon tapahtuessa, ja sitä on erittäin vaikea poistaa.
Lisäksi vakiolämpötilan amplifikaatio on myös alttiimpi epäspesifiselle amplifikaatiolle, kun näyte on monimutkainen (suhteellinen reaktiolämpötila on alhaisempi ja mitä korkeampi pidennyslämpötila, sitä parempi alukkeen sitoutumisspesifisyys).
Mitä tulee nykyiseen tekniikkaan, muuttuvan lämpötilan vahvistus on luotettavampi.
5. Kuinka välttää nukleiinihapon monistustuotteiden vuotamisen riski?
Tällä hetkellä monet valmistajat valitsevat rauhastyyppisen PCR-putken nukleiinihapporeaktioputkeksi, joka on tiivistetty kitkalla ja lämpötilan denaturaatio muuttuvan lämpötilan denaturaatiossa muuttuvan lämpötilan PCR-amplifikaatiossa saavuttaa 90 astetta.
Celsiusaste. Toistuva laajeneminen lämmöllä ja supistuminen kylmällä on suuri haaste PCR-putken sulkemiselle, ja tiivistetyyppinen PCR-putki on suhteellisen helppo aiheuttaa vuotoa.
On suositeltavaa ottaa reaktio käyttöön täysin suljetulla sarjalla/putkella, jotta vältetään reaktiotuotteen vuotaminen. Olisi täydellistä, jos nukleiinihappojen uuttamista ja havaitsemista varten voitaisiin kehittää täysin suljettu pakkaus.
Joten New Techin uudessa täysin automaattisessa nukleiinihappojen uutto- ja havaitsemiskoneessa on edellä mainitut viisi optimaalista vaihtoehtoa.
Postitusaika: 09.08.2023